Lysfeltsmikroskopi er avhengig av absorpsjon og spredning av lys fra biologiske prøver for å generere kontrast. Det er den mest klassiske og allment brukte avbildningsmodaliteten innen biovitenskap, og brukes ofte i patologiske lysbildeundersøkelser, histologiske studier og pedagogiske demonstrasjoner.

Biologiske prøver spenner over et bredt spekter av romlige skalaer, fra kjerner og cytoplasma til komplette vevsstrukturer, og dekker dimensjoner fra mikrometer til millimeter. I sin ufargede tilstand er prøvene nesten gjennomsiktige med minimale brytningsindeksforskjeller, noe som resulterer i dårlig kontrast. Følgelig brukes ofte ulike fargeteknikker for å forbedre bildekontrasten. Basert på disse egenskapene stiller lysfeltmikroskopi høye krav til kameraets ytelse, spesielt når det gjelder romlig oppløsning og fargegjengivelse.